酶联斑点图像分析仪选型
德国bio-sys品牌bioreader
酶联斑点图像分析仪特点：
可检测普通酶联免yi斑点，还可进行病毒噬斑/空斑等检测；
适用板型6/12/24/48/384孔板和培养皿等
光照调节：自动光照调节，可自动获取各种微孔板的图像；
综合质量控制模块，提供符合GLP规范的标准板，并能够使用标准板进行系统自动校验，保证斑点判读标准的一致性
统计学插件：统计分析各孔斑点分布情况、抗原刺激情况、细胞因字分泌情况等
至少包含酶联斑点分析、病毒噬斑等的检测分析功能，符合数据的采集和分析的规范。软件包含触控操作功能；一体化软件，在同一软件中，可同步完成斑点图像扫描、斑点计数与数据分析。
成熟文献1000+，国内使用的近百家。
BIOREADER 4000 E y厂家原理
将细胞置于包被有特异性Antibody的96孔板中培养，在有刺激的条件下，细胞分泌的细胞因子或免疫球蛋白会被包被Antibody捕获。移除细胞后，被capture的细胞因子可进一步使用生物素标记的二抗来标识，其后再与酶标记的亲和素作用，并加入底物使其呈色，有反应作用的细胞会留下直径大小不等的stained spots。
1. 加入细胞到含有（或不含）刺激物中培养；
2. 阳性细胞开始分泌细胞因子，细胞因子就近被包被Antibody捕获；
3. 移出细胞，清洗板子，加入生物素标记的检测Antibody，形成“Antibody-抗原-Antibody”夹心结构；
4. 为了观察膜上斑点的形成，加入酶标记的亲和素；
5. 加入显色底物，在酶的催化分解下，生成不可溶的色素，就近沉淀在局部的膜上形成斑点；
6. 斑点计数（可用bioreader自动读板仪计数），数据处理，结果分析。
03BIOREADER 4000 E y厂家免疫学基础研究
根据检测的细胞因子的不同，ELISPOT可以用来区分被activation的不同的T细胞亚群。例如Th1细胞主要分泌IFN-γ，IL-2和TNF-α，而其他一些细胞因子如IL-4，IL-5和IL-13一般是由Th2细胞分泌的。在过敏研究中的一个热点就是采用ELISPOT测定Th2型细胞因子，因为Th2反应是过敏的主要反应，但通常都是低频率岀现，需要高度灵敏方法才能被成功检测到。
04过敏研究
在针对特异反应性过敏的免疫treat中监测T细胞免疫反应；在细胞介导的接触过敏的体外检测诊断的应用中，ELISPOT方法受到越来越多过敏工作者的关注。因为对于像Th2型反应主要细胞因子IL-4这样的一贯很难通过其他方法如 flow cytometry和ELISA检测到的因子来说，应用高灵敏度的ELISPOT方法对于研究过敏原特异性免疫反应显得尤为重要。
BIOREADER 4000 E y厂家（ELISPOT）的原理是什么呢BIOREADER 4000 E y厂家（ELISPOT）的原理是什么呢
（一）原理：细胞受到刺激后局部产生细胞因子，被PVDF膜上特异性单clone Antibody捕获。细胞分解后，再与生物素标记的二抗结合，其后再与碱性磷酸酶标记的亲和素结合。BCIP/NBT底物孵育后，PVDF膜出现“紫色”的斑点为阳性反应。
（二）ELISPOT与ELISA的区别
1.ELISA通过显色反应，在Microplate reader上测定吸光度，与标准曲线比较得出可溶性蛋白总量。
2.ELISPOT通过显色反应，在细胞分泌这种可溶性蛋白的相应位置上显现清晰可辨的斑点，可直接在显微镜下或通过仪器对斑点进行计数，1个斑点代表1个细胞，从而计算出分泌该蛋白的细胞的频率。
3.由于是单细胞水平检测，ELISPOT比ELISA和有限稀释法等更灵敏，能从20万～30万个细胞中检出1个分泌该蛋白的细胞。
4.捕获Antibody为高亲和力、高特异性和低内toxin McAb，在研究者以刺激剂activation细胞时，不会影响活化细胞分泌细胞因子。