实验动物的采集方法
1. 大鼠、小鼠的采集:用颈椎脱臼法处死动物,剥离出胸骨或股骨,用吸取少量的Hank平衡盐溶液,冲洗出胸骨或股骨中全部液。如果是取少量的作检查,可将胸骨或股骨剪断,将其断面的挤在有稀释液的玻片上,混匀后涂片凉干即可染色检查。
2. 大动物的采集:狗等大动物的采集可采取穿刺方法。 先将动物、固定、局部除毛、消毒皮肤,然后估计好皮肤到的距离,把穿刺针的长度固定好。狗等大动物常用的穿刺点:胸骨:穿刺部位是胸骨体与胸骨柄连接处。操作人员用左手把穿刺点周围的皮肤绷紧,右手将穿刺针在穿刺点垂直刺入,穿入固定后,轻轻左右旋转将穿刺针钻入,当穿刺针进入腔时常有落空感。狗的采集,一般采用髂骨穿刺。
狗等大动物常用的穿刺点:胸骨:穿刺部位是胸骨体与胸骨柄连接处。肋骨:穿刺部位是第5~7肋骨各点的中点。胫骨:穿刺部位是股骨内侧、靠下端的凹面处。如果穿刺采用的是肋骨,穿刺结束后要用胶布封贴穿刺孔,防止发生。
营养不良性gan硬化动物模型
(1)fu制方法离乳雄性大鼠,每日喂食缺乏dan碱的低蛋白高脂肪饲料8~10g,连续2~3个月。如A系、C3H系、AKR系、津白Ⅱ等小鼠是高癌品系小鼠,C3H/He系经产雌鼠有80~的自发性。该饲料用酪蛋白或大豆作为蛋白来源,另加蔗糖、猪油、维生素粉、盐和定量的L-胱酸而组成。造模过程中,每日观察动物的一般活动状况,每周称量动物体重,造模结束后抽取全血制备xue清、称取部分肝组织制备匀浆作生化检测,摘取一些qi官称重,换算成脏器系数,并对肝组织进行组织形态学检查。
(2)模型特点造模1个月时,约有20%动物si亡,2个月时,动物体重增长停止,有fu水潴留、出血、脱毛等现象出现,巨检可见典型的肝结节、脾肿大、腹shui潴留、yi腺肿大、gao丸萎缩等特有症状,有的还出现shen硬化,光镜检查显示,造模初期,肝组织呈小结节性脂肪gan硬化,随着饲育时闯的延长,出现粗大的结节性或小叶性gan硬化。结果jia亢方能降低jia亢大鼠xie清T3、T4、FT3、FT4含量,提高xue清TSH,以高剂量效果显著。
(3)比较医学膳食不平衡或特种营养素缺乏可以导致动物肝细胞病变。实验证明,长期喂食dan碱缺乏食物可诱发大鼠肝脂变、肝纤维化乃至gan硬化。本模型采用离乳大鼠是由于幼鼠在发育期阶段对dan碱的需求量较大,因dan碱缺乏造成对机体伤害的敏感性自然比成年动物更强。因此,设计动物疾病模型的一个重要原则是,所的模型应尽可能近似于人类疾病的情况。但事实上,对dan碱缺乏的敏感性取决于体内dan碱氧化酶的含量。人类gan脏不含dan碱氧化酶,不存在dan碱缺乏问题,所以此模型不适于在发病机制上进行人类相关疾病的研究。不过,该模型由于fu制周期长,饲料配制复杂,花费大,现已少见有单用此方法造模者。此外,实验中使用雄性动物雄鼠是因为雄性动物在向gan硬化转化过程中比雌性动物更为均一。在饲料中混入微量的半胱氨酸具有促进gan硬化发展的作用。
HBV模型的建立方法
(1)方法:主要使用各种技术来创建HBV病毒小鼠模型。小鼠模型可分为HBV部分片段和HBV全长或超长序列模型。
(2)模型特征HBV小鼠不受HBV的影响,不会引起免yi清除。该模型可用于观察HBV对肝细胞的直接破坏作用。含有外源启动子的HBsAg小鼠(50-4)产生大量HBsAg大包膜蛋白。自发性狗类性与人类幼年型类性十分相似,也是一种理想模型,等等。这会导致很长的,有时是分支的杆状HBsAg积聚在肝细胞的内质网中,并且无法有效分泌。肝细胞显示出毛玻璃变色并损害肝细胞。小鼠中的HBV标记主要在gan脏中表达,也可以在shen脏,yi腺和外周血等qi官中表达,尤其是在1,096 bp 1.3拷贝的HBV小鼠中。xue清HBV DNA的水平相当于3x10000000至9x10000000基因组当量/毫升,相当于慢性HBVgan染者的水平。它可以检测血液中的HBsAg,S1前和HBeAg,是用于yao物筛选的you秀模型。
(3)建立比较yao物HBV小鼠模型在HBV分子生物学和免yi学研究中,特别是在加强肝细胞HBV感ran的分子机制方面,具有重要意义。
Y迷宫实验几种常见的行为学测试方法
1、Y迷宫(Y-Maze)交替行为测试原理
Y-迷宫由Dellu F等发明,被广泛应用于功能减退、趋向性、空间工作记忆等研究领域。对于猴、狗、猫等动物有时可不做标记,只记录它们的外表特征和毛色即可。Y迷宫主要用于研究啮齿类动空间工作记忆,其完全是利用实验动物对新异环境探索的天性,由于动物每次转换探索方向时都需要记住前一次探索过的方向,因此Y型迷宫实验能够有效地测定动物的空间工作能力。
1.1Y迷宫交替行为测试及参数
自制Y迷宫,由3等长臂组成(50cm×18cm×35cm),每两个臂之间夹角为
120度,在中央处各有一个可移动的隔板,迷宫内臂及底部均涂为黑色。参照文献实验操作方法并加以改进,将大鼠放在Y迷宫任意一臂末端,任其自由探索8min,摄像系统记录动物8min的行为变化,记录以下各项指标:①总进臂次数(the total number of entries):动物进入迷宫臂的次数(以大鼠四只脚均进入臂为进臂一次标准);②轮流(交替)一次(an alternation):依次连续进入Y迷宫全部三个臂一次。不过,该模型由于fu制周期长,饲料配制复杂,花费大,现已少见有单用此方法造模者。③*大轮流次数(The number of maximum alternati):总进臂次数-2。自发轮流行为得分=总轮流次数/*大轮流次数*。